I - Preparo
- Após dieta leve, o jejum não é necessário. Caso contrário, sugere-se jejum de três horas.
- O cliente deve informar todos os medicamentos tomados nos últimos sete dias, especialmente anticoagulante oral e heparina.

II - Para usuários de heparina
- Clientes que usam heparina em injeções intermitentes devem colher o exame uma hora antes da próxima dose. Caso a heparina já tenha sido aplicada, a coleta deve ser feita três horas após a aplicação. Esta orientação não vale para usuários de heparina em infusão contínua.

Verificar:
Se há presença de coágulo, invertendo gentilmente o tubo. Se houver, recusar o material.
Se o volume de sangue + o anticoagulante atingiu 90% ou mais do nível do tubo (observar tabela com referência de preenchimento).
Se o volume estiver incorreto, solicitar coleta de novo material ou em caso de dúvida contatar um colaborador do Setor de Hemostasia.

PREPARO DO MATERIAL A SER ENVIADO CONGELADO (plasma pobre em plaquetas)

IMPORTANTE: para a centrifugação do Plasma Pobre em Plaquetas (PPP) é necessário realizar DUPLA CENTRIFUGAÇÃO

1) No máximo até 3 horas após a coleta, centrifugar os dois tubos a temperatura ambiente ou a 18 ºC em 2.200 g durante 15 minutos ***

2) Retirar o material da centrífuga e observar se o paciente tem hematócrito alto (utilizar tabela).
Se a papa de hemácias for superior ao limite indicado, isto significa que o paciente tem hematócrito superior a 55%.
Nesta situação, avisar e encaminhar o material aos cuidados de um colaborador do Setor de Hemostasia.

Amostra hemolisada: consultar a régua de hemólise (vide ITR-.DIS-00059)

Procedimento para amostra hemolisada:
Comparar a amostra hemolisada com a régua de hemólise para checar o índice hemolítico seguindo as orientações abaixo:
* Amostra com índice hemolítico até 30 mg/dL: liberar resultado sem nota
* Amostra com índice hemolítico de 40 a 200 mg/dL: liberar resultado com nota
* Amostra com índice hemolítico maior que 200 mg/dL: solicitar nova coleta


3) Identificar 1 tubo plástico de 4,0 mL, separar cuidadosamente o plasma dos dois tubos com pipeta plástica sem tocar na camada onde estão as plaquetas e sem formar """"espuma"""".

4)Tampar.

5)Repetir o processo de centrifugação e separação.

6) Aliquotar NO MÍNIMO 2 mL do plasma pobre em plaquetas em 1 tubo de 4,0 mL.

Obs: para coleta tubo infantil aliquotar 1,5 mL do plasma pobre

7) Tampar

7) Colocar o material no gelo seco.

9) Encaminhar o material para o Setor de Hemostasia congelado em gelo seco.

Estabilidade da amostra:
Temperatura ambiente: 4 horas em tubo primário ou plasma;
Refrigerada (2ºC a 8ºC): não aceitável;
Congelada (- 20ºC): 2 semanas;
Congelada (- 70ºC): 6 meses.

Teste realizado em 3 etapas seqüenciais:

1ª. etapa - Testes de triagem: TTPA, dRVVT
. Identificação de anormalidade em teste fosfolípede-dependente utilizando
reagente com baixa concentração de fosfolípides

2ª. etapa: Estudo da mistura com plasma normal ("mixing-study")
. Demonstração que a anormalidade é causada por um inibidor inespecífico e não por deficiências de fatores da coagulação

3ª etapa: Procedimento confirmatório: DVVconfirmatório, fosfolípide de fase hexagonal
. Caracterização da presença do inibidor inespecífico (Anticoagulante Lúpico) utilizando reagente com alta concentração de fosfolípides

1ª etapa: Triagem de anormalidades em teste fosfolípide-dependente.

TTPA menor ou igual a 1,16: ausência de inibidor
dRVVT menor ou igual a 1,20 ausência de inibidor

2ª etapa: Caracterização do inibidor como fosfolípide- dependente

TTPA menor ou igual a 1,16: AUSÊNCIA de inibidor inespecífico (Anticoagulante Lúpico)

dRVVT menor ou igual a 1,20 AUSÊNCIA de inibidor inespecífico (Anticoagulante Lúpico)

3ª etapa: Demonstração da presença do inibidor (testes após mistura do plasma do paciente com "pool" de plasmas normais)
. Se há "correção" do tempo obtido na 1ª etapa = deficiência de fator(es)
. Se NÃO há "correção" do tempo obtido na 1ª etapa = presença de um inibidor

- Os anticoagulantes lúpicos (LAC), assim como os anticorpos anticardiolipina (ACA), são imunoglobulinas antifosfolipídicas heterogêneas, pertencentes às classes IgG, IgM ou IgA, que interferem nos testes de coagulação fosfolipíde-dependentes.
- Esses anticorpos podem ocorrer em duas síndromes intimamente relacionadas, porém clínica, bioquímica e laboratorialmente distintas: a síndrome antifosfolipídica primária e a síndrome antifosfolipídica secundária. Ambas se associam a manifestações tromboembólicas (venosas, arteriais e de microcirculação) em qualquer tecido ou órgão e a complicações da gestação (abortos espontâneos de repetição, morte fetal e nascimento de prematuros).
- LACs e ACAs podem estar presentes nas quatro situações abaixo especificadas:
1) Em indivíduos normais, sem doença de base.
2) Em portadores de afecções de base, entre as quais:
-- doenças auto-imunes (lúpus eritematoso sistêmico, anemia hemolítica auto-imune e artrite reumatóide);
-- doenças do tecido conjuntivo;
-- neoplasias malignas;
-- quadros neurológicos (acidente cerebral isquêmico, acidente isquêmico transitório, epilepsia, coréia, enxaqueca, esclerose múltipla, amaurose fugaz, mielite transversa, síndrome de Sneddon e síndrome de Guillain-Barré);
-- quadros cardíacos: doença valvular mitral e coronariana;
-- quadros dermatológicos: livedo reticularis e necrose de dedos e dérmica;
-- quadros hematológicos: anemia hemolítica Coombs-positiva.
3) Durante o uso de medicamentos (hidralazina, procainamida, interferon, clorpromazina, quinidina, fenitoína e vários antibióticos, entre outros).
4) Pós-infecções virais (HIV), bacterianas (amigdalite inespecífica) ou parasitárias (Pneumocystis).
- Convém ressaltar que o LAC e o ACA não são os mesmos anticorpos e podem ocorrer independentemente. Na vigência de suspeita clínica, ambos devem ser pesquisados.